荧光定量pcr仪器怎么校准,荧光定量pcr仪器校准步骤

荧光定量pcr仪器怎么校准

热电阻校准

热电阻校准是实时荧光定量PCR仪校准的第一步。其目的是保证PCR仪的耐热性符合要求。

步骤如下：

引入热阻校准物质，通常是水样。设定PCR机的控制程序，逐渐升高然后降低温度，以获得完整的温度-时间曲线。将实时荧光信号与温度曲线进行校准和比较，以确保信号的准确性和一致性。

相对荧光强度校准

相对荧光强度校准旨在校准实时荧光定量PCR仪的荧光检测器。步骤如下：引入荧光校准标准物质，通常是荧光强度已知的DNA模板。设置PCR仪的控制程序，检测荧光信号。通过使用具有已知浓度的标准来构建标准曲线，以确定荧光信号和目标物质浓度之间的关系。标准曲线定量分析实时荧光信号。

CT值校准

CT值校准是判断实时荧光定量PCR仪扩增效率和灵敏度的关键步骤。步骤如下：准备所需的DNA模板，确保初始浓度能够覆盖检测灵敏度范围。将DNA模板导入PCR仪进行扩增反应。通过计算CT值（循环阈值）确定扩增曲线的准确性和灵敏度。分析CT值与模板浓度的线性关系，保证PCR扩增结果的准确性。

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